TGuide жасушалары/тіндердің геномдық ДНҚ жинағы

A-1 Бастапқы үлгідегі жасушалардың немесе вирустың төмен концентрациясы-жасушалар мен вирустардың концентрациясын байытыңыз.

A-2 Үлгілердің жеткіліксіз лизисі-Үлгілер лизис буферімен мұқият араластырылмаған. Импульсті құйындымен 1-2 рет мұқият араластыру ұсынылады. - протеиназаның белсенділігінің төмендеуінен туындаған жасуша лизисінің жеткіліксіздігі - жасушаның лизисінің жеткіліксіздігі немесе жылы ваннаның жеткіліксіз болуына байланысты ақуыздың деградациясы. Лизаттағы барлық қалдықтарды кетіру үшін матаны кішкене бөліктерге бөліп, ваннаның уақытын ұзарту ұсынылады.

А-3 ДНҚ адсорбциясы жеткіліксіз. -100% этанолдың орнына этанол немесе төмен пайыз қосылған жоқ, ол лизатты айналдыру колоннасына жібермес бұрын.

A-4 Элюция буферінің рН мәні тым төмен. -pH мәнін 8.0-8.3 аралығында реттеңіз.

Элюенттегі этанолдың қалдықтары.

—Элюментте PW қалдық жуу буфері бар. Этанолды айналдыру бағанасын 3-5 минут центрифугалау арқылы алып тастауға болады, содан кейін бөлме температурасына немесе 50 ℃ инкубаторға 1-2 минут қояды.

A-1 Үлгі жаңа емес. - Үлгідегі ДНҚ -ның деградацияланғанын анықтау үшін бақылау ретінде оң ДНҚ үлгісін алыңыз.

А-2 Алдын ала дұрыс емделмеген. - Шамадан тыс сұйық азотты ұнтақтау, ылғалды қалпына келтіру немесе сынаманың тым көп мөлшерінің әсерінен.

Алдын ала өңдеу әр түрлі үлгілер үшін әр түрлі болуы керек. Өсімдік үлгілері үшін сұйық азотты мұқият ұнтақтауды ұмытпаңыз. Жануарлардың үлгілері үшін сұйық азотта гомогенат немесе мұқият ұнтақтайды. G+ бактериялары мен ашытқылары сынуы қиын жасушалық қабырғалары бар үлгілер үшін жасуша қабырғаларын бұзу үшін лизоцим, литиказа немесе механикалық әдістерді қолдану ұсынылады.

4992201/4992202 Өсімдіктердің геномдық ДНҚ жиынтығы экстракция үшін хлороформды қажет ететін бағаналы әдісті қолданады. Ол әсіресе өсімдіктердің әр түрлі үлгілеріне, сондай -ақ өсімдіктердің құрғақ ұнтағына жарайды. Hi-DNAsecure Plant жиынтығы сонымен қатар бағаналы, бірақ фенолды/хлороформды экстракциялауды қажет етпейді, бұл оны қауіпсіз және улы емес етеді. Ол полисахаридтері жоғары және құрамында полифенол бар өсімдіктер үшін қолайлы. 4992709/4992710 DNAquick Plant System сұйықтыққа негізделген әдісті қолданады. Фенол/хлороформ экстракциясы да қажет емес. Тазарту процедурасы қарапайым және жылдам, іріктеудің бастапқы мөлшеріне шектеу жоқ, сондықтан пайдаланушылар эксперименттік талаптарға сәйкес мөлшерді икемді түрде реттей алады. GDNA фрагменттерінің үлкен мөлшерін жоғары өнімділікпен алуға болады.

Геномдық ДНҚ TIANamp Blood DNA DNA жиынтығымен әр түрлі көлемдегі адам қанының үлгілерінен алынды. Нәтижелер келесідей. Нәтижелер тек сілтеме ретінде тізімделеді, экстракцияның нақты нәтижелері үлгілердің жағдайына байланысты.

Қан ұйығышының ДНҚ экстракциясын осы екі жиынтықта берілген реагенттерді қолдана отырып, қан ұйығышын ДНҚ алу жөніндегі арнайы нұсқаулыққа өзгерту арқылы жасауға болады. Қан ұйығышының ДНҚ алу хаттамасының жұмсақ көшірмесі сұраныс бойынша шығарылуы мүмкін.

Жаңа үлгіні 1 мл PBS, қалыпты физиологиялық ерітінді немесе ТЭ буферімен суспензиялаңыз. Үлгіні гомогенизатормен толық гомогенизациялайды және тұнбаны центрифугалау арқылы түтік түбіне жинайды. Тұнбаны тастаңыз және тұнбаны GA 200 мкл буфермен қайта тұндырыңыз. Нұсқаулыққа сәйкес келесі ДНҚ тазартуды жүргізуге болады.

ГДНҚ -ны плазмадан, сарысудан және дене сұйықтығынан тазарту үшін TIANamp Micro DNA жиынтығы ұсынылады. Сарысу/плазмалық үлгілерден gDNA вирусын тазарту үшін TIANamp вирусының ДНҚ/РНҚ жинағы ұсынылады. Сарысу мен плазмалық үлгілерден бактериялық гДНҚ тазарту үшін TIANamp Bacteria DNA жиынтығы ұсынылады (оң бактериялар үшін лизоцим қосылуы керек). Сілекей үлгілері үшін Hi-Swab DNA жиынтығы мен TIANamp Bacteria DNA жиынтығы ұсынылады.

Саңырауқұлақ геномын алу үшін DNAsecure Plant Kit немесе DNAquick Plant System ұсынылады. Ашытқы геномын алу үшін TIANamp ашытқы ДНҚ жинағы ұсынылады (литиказа өздігінен дайындалуы керек).