FastKing RT жиынтығы (gDNase көмегімен)

Кез келген тізбекті тиімді оқыңыз және аз мөлшердегі шаблондарды дәл анықтаңыз.

FastKing RT жиынтығы (gDNase көмегімен) - геномдық ДНҚ ластануын жоюға қабілетті тиімді, тұрақты және жылдам кері транскрипция жүйесі. Жинақта геномдық ДНҚ -ны тиімді жоюға арналған, бірақ cDNA сапасына әсер етпейтін gDNase бар. FastKing RT Enzyme жоғары тиімді кері транскриптазасы қалыпты немесе жоғары ГК мазмұны мен күрделі қайталама құрылымы бар РНҚ шаблондары үшін және кернеуге төзімді.

Мысық Жоқ Қаптама мөлшері
4992223 25 rxn
4992224 100 rxn
4992250 1000 rxn

Өнім туралы мәліметтер

Тәжірибелік мысал

Жиі қойылатын сұрақтар

Өнім тегтері

Мүмкіндіктер

■ Жоғары тиімділік: FastKing RT Enzyme гидрофобты мотивпен өзгертілген, RT тиімділігі 95%жоғары.
■ Сезімтал: 1 нг дейінгі үлгілерді дәл анықтауға болады.
■ Резистенттілік: қоспаларға тамаша төзімділігі бар күрделі шаблондарды кері транскрипциялауға қабілетті.
■ Икемді: геномдық ДНҚ жою және кері транскрипция бөлек аяқталды. Праймерлер басқа праймерлерді өзгерту үшін икемді түрде түтікке бөлек араластырылды.

Техникалық сипаттамасы

Түрі: гендік модификацияланған кері транскриптаз, gDNase
Процедуралар: екі сатылы (геномдық ДНҚ жою және РТ)
RT тиімділігі:> 95%
Үлгі: 1 нг- 2 мкг
Жұмыс уақыты: ~ 21 мин
Қолданбалар: кері транскрипцияланған cDNA әдеттегі ПТР, нақты уақыттағы ПТР, cDNA кітапханасының құрылысында қолданылуы мүмкін.

Бір құбырлы реакция 21 мин

Реактивті түтікті және тәуелсіз DNase I өңдеу процесін алмастырмай, сол түтікте gDNA жою мен кері транскрипцияның тиімді процесін аяқтауға небәрі 21 минут кетеді. 12 қадамды және 140 минуттық реакцияны қажет ететін дәстүрлі әдіспен салыстырғанда, бұл операция кезеңдерін айтарлықтай жеңілдетеді және жұмыс уақытын едәуір үнемдейді.

21 min reaction in one-tube

King RTase керемет сапасы

—— Өте жоғары кері транскрипция тиімділігі
—— Кері транскрипция тиімділігі 95% жоғары
Жалпы кері транскриптазаның кері транскрипция тиімділігі 40-60%құрайды, ал ЦДНҚ шығымдылығы РНҚ жүктелуінің жоғары мөлшерімен ұлғайтылуы мүмкін. King reverse transcriptase РНҚ шаблондарына бірегей жоғары жақындығының арқасында 95% -дан астам кері транскрипция тиімділігіне қол жеткізе алады. Сондықтан келесі эксперименттер РНҚ -ны үнемдейтін және жоғары тазалық пен цДНҚ -ның жоғары шығымдылығын қамтамасыз ететін РНҚ -ның көп мөлшерін енгізуді қажет етпестен қанағаттандырылуы мүмкін.
Outstanding quality of King RTase

Күрделі үлгілер арқылы оңай оқыңыз

—— Жоғары GC және күрделі шаблондар арқылы оңай оқыңыз
Бір тізбекті РНҚ тізбектер арасындағы сутектік байланыстың арқасында күрделі қайталама құрылымдық аймақтардың кең ауқымына ие. Кәдімгі кері транскриптаза күрделі қайталама құрылыммен кездескенде кері транскрипцияны тоқтатуға әкелуі мүмкін, осылайша цДНҚ синтезін сәтті аяқтай алмайды. Алайда, жаңа буын King кері транскриптазасы бірегей құрылымдық доменге ие, ол РНҚ тізбектері арасындағы сутектік байланысты бұза алады, осылайша РНҚ -ның күрделі қайталама құрылымын ашады және біркелкі кері транскрипцияны қамтамасыз етеді.

Easily read through complex templates

Барлық өнімдерді ODM/OEM үшін теңшеуге болады. Мәліметтер үшін,Customized Service (ODM/OEM) түймесін басыңыз


  • Алдыңғы:
  • Келесі:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Experimental Example 1 -топ: gDNase емделусіз кері транскрипция; 2 -топ: gDNase емделмеген және кері транскрипциясы жоқ; 3 -топ: gDNase емінен кейін кері транскрипция; 4 -топ: кері транскрипциясы жоқ gDNase емі. Әдістер: TNF-альфа генінің флюоресцентті сандық ПТР диагностикасы (үлгі ретінде cDNA немесе геномы бар экзонға арналған праймер) үлгі ретінде 1 мкг Hela жасушалық РНҚ (геном қалдықтары бар). Нәтижелер: Суретте көрсетілгендей, 2-топ көрсете алады РНҚ-дағы геномның қалдығы, 3-топ TNF-альфаның шынайы экспрессия деңгейін дәл көрсете алады, 1-топта геномдық қалдықтан соңғы сандық нәтижелерде қателіктер бар, ал 4-топ FastKing RT жиынтығындағы геномдық ДНҚ-ның қалдықтарын толығымен жоя алатынын көрсетеді. РНҚ.
    Experimental Example Сурет 1. Тышқан РНҚ -ның кері транскрипциясы TIANGEN FastKing RT жиынтығының көмегімен (сол жақта) және жеткізуші А -ның тиісті өнімі (оң жақта) көмегімен орындалды, содан кейін MM5 гені TIANGEN SuperReal PreMix Plus (SYBR Green) көмегімен сандық түрде күшейтілді. Күшейту қисығы мен балқу қисығы талданды. РНҚ кірісі сәйкесінше 1000 нг, 100 нг, 10 нг және 1 нг болды. Нәтижелер көрсеткендей, TIANGEN FastKing RT Kit анық кері транскрипция градиентіне және төмен Ct мәніне ие және төмен молшылық шаблонының кері транскрипциясы үшін айқын артықшылықтарға ие (1 нг, көк көрсеткі).
    Experimental Example Сурет 2. Қалыпты РНҚ үлгісінің кері транскрипциясы (қызыл), үлкен фенол қалдығы бар шаблон (жасыл) және TIANGEN FastKing RT Kit және егжей -тегжейлі егеуқұйрықтардың қалдығы (көк) бар шаблон және сәйкес жеткізуші А өнімінің сәйкес транскрипциясы, TNANGEN SuperReal көмегімен RNC гендерін анықтайды. PreMix Plus (SYBR Green), күшейту қисықтары мен Ct мәндері талданды. Нәтижелер көрсеткендей, TIANGEN FastKing RT Kit кері транскрипциядан және кернеуге төзімділіктен кейінгі ең төменгі сандық мәнге ие және қоспасы жоғары қалдықтары бар шаблондар үшін айқын артықшылықтарға ие.
    Q: RT-ПТР өнімі аз немесе жоқ

    А-1 РНҚ ыдырайды

    —— Ластанбаған жоғары сапалы РНҚ тазартыңыз. РНҚ алынатын материал РНҚ деградациясын болдырмау үшін мүмкіндігінше жаңа болуы керек. RT реакциясы алдында денатурленген гельдегі РНҚ тұтастығын талдаңыз. РНҚ экстракциясынан кейін оны 100% формамидте сақтау керек. Егер RNase ингибиторы қолданылса, қыздыру температурасы <45 ° C, ал рН 8,0 -ден төмен болуы керек, әйтпесе ингибитор барлық байланысқан РНазаны босатады. Сонымен қатар, құрамында 0,0 мм ДТТ бар ерітінділерге РНаза ингибиторын қосу керек.

    А-2 РНҚ құрамында кері транскрипция реакцияларының ингибиторлары бар

    —— Кері транскрипция ингибиторларына SDS, EDTA, глицерин, натрий пирофосфаты, спермидин, форамид, гуанидин тұзы және т.б жатады. Бақылау РНҚ -сын үлгімен араластырыңыз және ингибитордың бар -жоғын тексеру үшін шығымды басқарушы РНҚ реакциясымен салыстырыңыз. Ингибиторларды кетіру үшін РНҚ тұнбасын 70% (көлемдік көлем) этанолмен жуыңыз.

    A-3 ЦДНҚ-ның бірінші тізбегін синтездеу үшін қолданылатын праймерлерді жеткіліксіз күйдіру

    ——Жылу температурасы экспериментте қолданылатын праймерлерге жарамды екенін анықтаңыз. Кездейсоқ гексамерлер үшін реакция температурасына жеткенге дейін температураны 25 ° C температурада 10 минут ұстау ұсынылады. Гендік праймерлер (GSP) үшін басқа GSP қолданыңыз немесе олиго (dT) немесе кездейсоқ гексамерге ауысыңыз.

    A-4 РНҚ-ның аз мөлшері

    —— РНҚ мөлшерін көбейтіңіз. РНҚ үлгілері үшін 50 нг аз, 0,1 мкг -ден 0,5 мкг ацетил BSA -ны бірінші тізбекті cDNA синтезінде қолдануға болады.

    А-5 Мақсатты реттілік талданатын тіндерде көрсетілмейді.

    —— Басқа тіндерді қолданып көріңіз.

    А-6 ПТР реакциясы сәтсіз аяқталады

    —– Екі сатылы RT-ПТР үшін ПТР қадамындағы cDNA үлгісі реакция көлемінің 1/5 бөлігінен аспауы керек.

    С: Арнайы емес жолақтар пайда болады

    A-1 Праймер мен шаблондарды спецификалық емес күйдіру

    —— Праймерлердің 3-ұшында 2-3 дГ немесе дК болмауы керек. Кездейсоқ праймерлердің немесе олигоның (dT) орнына бірінші тізбекті синтездеуде Генге тән праймерлерді қолданыңыз. Алғашқы бірнеше циклде жоғары күйдіру температурасын қолданыңыз, содан кейін күйдіру температурасын төмендетіңіз. Реакцияның ерекшелігін жақсарту үшін ПТР үшін ыстық старттық Taq ДНҚ полимеразасын қолданыңыз.

    A-2 Гендік спрейлердің нашар дизайны

    —— Праймер дизайнын күшейту үшін сол принциптерді орындаңыз.

    А-3 РНҚ геномдық ДНҚ-мен ластанған

    —— РНҚ-ны ПТР-дәрежелі DNase I. көмегімен емдеңіз, ДНҚ-ның ластануын анықтау үшін кері транскрипциясы жоқ бақылау реакциясын орнатыңыз.

    A-4 Праймер димерін қалыптастыру

    —– 3 'соңында қосымша тізбектері жоқ праймерлерді жобалау.

    A-5 Тым жоғары Mg2+ концентрация

    Mg оптимизациялау2+ әр шаблон мен праймер комбинациясы үшін концентрация

    А-6 Шетелдік ДНҚ-мен ластанған

    —— Аэрозольге төзімді ұштар мен UDG ферменттерін қолданыңыз.

    С: жағынды топтар

    A-1 Бірінші тізбекті өнімнің мазмұны тым жоғары

    —— Кәдімгі ПТР реакция сатысында бірінші жолақты өнімнің мөлшерін азайтыңыз.

    А-2 ПТР реакциясында тым жоғары праймер мөлшері

    —— Праймер кірісін азайтыңыз.

    A-3 Циклдар тым көп

    —— ПТР реакция шарттарын оңтайландырыңыз және ПТР циклінің санын азайтыңыз.

    A-4 Жылу температурасы өте төмен

    —– Спецификалық емес инициация мен созылуды болдырмау үшін күйдіру температурасын жоғарылатыңыз.

    A-5 ДНҚ-ның DNase деградациясы нәтижесінде пайда болатын олигонуклеотид фрагменттерінің спецификалық емес күшеюі-ДНҚ-ның ластануын болдырмау үшін жоғары сапалы РНҚ-ны шығарыңыз.

    Q: RT-ПТР үшін праймерді қалай таңдауға болады?

    RT-ПТР-бұл РНҚ-ны цДНҚ-ға кері транскрипциялау, содан кейін мақсатты фрагментті күшейту үшін ПТР реакциясының үлгісі ретінде кері транскрипцияланған цДНҚ-ны қолдану. Эксперименттің нақты шарттарына сәйкес кездейсоқ праймерлерді, Oligo dT және гендік спрейлерді таңдаңыз. Жоғарыда аталған барлық праймерлерді қысқышты құрылымсыз эукариотты жасушалық мРНҚ үшін қолдануға болады.

    Кездейсоқ праймер: Ұзын РНҚ-ға, сонымен қатар рРНҚ, мРНҚ, тРНҚ сияқты РНҚ-ның барлық түрлеріне сәйкес келеді. Олар негізінен бір үлгідегі РТ-ПТР реакциясы үшін қолданылады.

    Oligo dT: PolyA қалдықтары бар РНҚ үшін қолайлы (прокариотты РНҚ, эукариоттық Oligo dT рРНҚ мен тРНҚ -да полиА құйрықтары жоқ). Oligo dT PolyA құйрығына байланғандықтан, РНҚ үлгілерінің сапасы жоғары болуы қажет, тіпті аз мөлшердегі деградация цДНҚ синтезінің көлемін едәуір төмендетеді.

    Генге тән праймер: Үлгілер тізбегіне қосымша, мақсатты реттілік белгілі жағдайларға сәйкес келеді.

    Сұрақ: ЦНҚ бірінші тізбегіне РНҚ кері транскрипциясының табыстылығын қалай растауға болады?

    Екі жол бар:

    1. Ішкі анықтамалық әдіс: теорияда cDNA - әр түрлі ұзындықтағы ДНҚ фрагменттері, сондықтан электрофорез нәтижесі жағынды болып табылады. Егер РНҚ молдығы төмен болса, онда электрофорезде ешбір өнім көрсетілмейді, бірақ бұл ПТР көмегімен ешбір өнім күшейтілмейді дегенді білдірмейді. Жалпы, ішкі анықтаманы cDNA анықтау үшін қолдануға болады. Егер ішкі анықтаманың нәтижелері болса, cDNA сапасына негізінен кепілдік беруге болады (кейбір жағдайларда, егер мақсатты ген фрагменті тым ұзын болса, ерекшеліктер болуы мүмкін).

    2. Егер осы шаблонмен күшейтілген белгілі ген болса, оны осы геннің праймерлері арқылы тексеруге болады. Ішкі сілтемені күшейту міндетті түрде cDNA -мен проблема жоқ дегенді білдірмейді. Ішкі сілтеме cDNA -да көп болғандықтан, оны күшейту оңай. Егер cDNA әр түрлі себептермен ішінара ыдыраса, ықтималдық тұрғысынан төмен гендік мақсатты гендердің ПТР нәтижелері қатты әсер етеді. Ішкі сілтеме әлі де көп болса да, күшейтуге әсер етпеуі мүмкін.

    Q: RT-ПТР ішкі анықтамалық гендерді кеңейте алады, бірақ мақсатты гендерді емес

    РНҚ -ның жартылай ыдырауы. РНҚ -ның тұтастығын анықтаңыз және тазартыңыз

    Әр түрлі түрдегі РНҚ мазмұны әр түрлі болуы мүмкін, бірақ тұтастай алғанда, шығарылған жалпы РНҚ құрамында гель электрофорезінде 28S және 18S екі анық жолағы болуы керек, ал бұрынғы жолақтың жарықтығы соңғысынан екі есе жоғары болуы керек. 5S диапазоны РНҚ деградацияланғанын көрсетеді, ал оның жарықтығы деградация дәрежесіне пропорционалды. Ішкі сілтеменің сәтті күшеюі РНҚ -мен ешқандай проблема жоқ дегенді білдірмейді, себебі ішкі сілтеме өте көп, деградация қатты болмаса, РНҚ -ны күшейтуге болады. НҚ260/ОД280Спектрофотометрмен өлшенетін таза РНҚ қатынасы 1,9 мен 2,1 аралығында болуы керек. РНҚ -да ақуыз қоспасының аз мөлшері қатынасты төмендетеді. Егер мән тым төмен болмаса, RT әсер етпейді. RT үшін ең маңыздысы - РНҚ тұтастығы.

    Q: RT табысын қалай растауға болады?

    Ішкі сілтеме генінің кеңеюі тек RT сәтті болғанын көрсете алады, бірақ бұл міндетті түрде cDNA тізбегінің сапасына байланысты емес. Ішкі сілтеме фрагменттері әдетте көлемі жағынан кіші және өрнегі жоғары болғандықтан, оларға кері транскрипцияда табысты болу оңайырақ. Алайда, мақсатты геннің мөлшері мен экспрессиясы әр генде әр түрлі болады. CDNA сапасын тек ішкі сілтеме бойынша бағалауға болмайды, әсіресе 2 кб -тан асатын мақсатты фрагменттер үшін.

    Кейбір үлгілерде күрделі қайталама құрылымдар бар, немесе құрамында ГК көп немесе олар аз мөлшерде бағалы. Бұл жағдайда мақсатты фрагмент пен үлгіге сәйкес сәйкес кері транскриптазаны таңдау керек. Жоғары ГК мазмұны мен күрделі қайталама құрылымы бар РНҚ шаблондары үшін төмен температурада немесе жалпы кері транскриптазасы бар қайталама құрылымды ашу қиын. Бұл үлгілер үшін Quant Reverse Transcriptase таңдалуы мүмкін, себебі оның кері транскрипциясының өнімділігі M-MLV сериялы кері транскриптазаға қарағанда жақсы, ол әр түрлі РНҚ шаблондарын тиімді түрде транскрипциялауға және РНҚ-ны бірінші тізбекке максималды дәрежеде транскрипциялауға мүмкіндік береді. Жалпы кері транскриптаза жинағын қолданған кезде 20 мкл жүйе 1 мкг жалпы РНҚ -ны тиімді түрде кері қайтара алады. Жинақтың RT максималды сыйымдылығына назар аударыңыз. Егер шаблон шамадан тыс қосылса, кері транскрипция РНҚ -ны көп мөлшерде қолдайды. Сондықтан жүйенің максималды сыйымдылығынан аспаған дұрыс.

    Q: RT-ПТР ішкі анықтамалық генді күшейте алмайды

    A-1 РНҚ қатты ыдырайтынын және RT сәтті болғанын анықтаңыз

    Жалпы, ішкі анықтамалық күшейтудің сәтсіздігінің себебі көбінесе РНҚ -ның елеулі деградациясынан болады. Басқа ықтимал себеп - кері транскрипцияның бұзылуы. Ішкі анықтаманы cDNA бір тізбегінің сапасын бағалау үшін стандарт ретінде қолдануға болмайды, бірақ егер РНҚ сапасында проблема болмаса, кері транскрипцияның сәтті болғанын анықтау үшін стандарт ретінде қолдануға болады. Кері транскрипция процесінде ең бастысы - реакция тиімділігін жоғарылату үшін тұрақты температура мен тұрақты реакция жүйесін сақтау.

    A-2 Ішкі анықтамалық гендерді күшейтуге арналған праймерлердің сенімділігін және ПТР-да қолданылатын реагенттерге қатысты проблемалар бар-жоғын анықтаңыз.

    Сұрақ: Салыстырмалы сандық бағалау үшін РНҚ деңгейін анықтау кезінде әрбір үлгідегі РНҚ концентрациясы сәйкес болған жағдайда, цДНҚ -ға кері транскрипция қажет пе?

    Салыстырмалы мөлшерлеу үшін РНҚ -ны кері транскрипцияға дейін сандық түрде есептеу керек, ол көптеген кері транскрипция жинақтарында қажет, мысалы, РНҚ кірісін 1 мкг мөлшерінде санайды. Кері транскрипцияланған cDNA - бұл РНҚ, олиго dT, фермент, dNTP және тіпті ДНҚ -ның кішкене қалдықтары бар аралас ерітінді болғандықтан, ауытқу пайда болады, сондықтан цДНҚ -ны дәл сандық бағалау мүмкін емес. Сондықтан РНҚ мөлшерін анықтау қажет. Әр түрлі үлгілерде кері транскрипцияның тиімділігі бірдей екенін ескере отырып, алынған цДНҚ мөлшері бірдей болуы керек, ал сандық талдау жалпы гендік РНҚ -ның әр түрлі гендерінің экспрессия деңгейлерінің салыстыруын көрсете алады. Салыстырмалы флуоресцентті сандық ПТР жүргізгенде, кері транскрипциядан кейін сандық цДНҚ қажет болмауы мүмкін, себебі ішкі сілтеме гені сілтеме ретінде әрекет етуі мүмкін.

    С: Ұзын фрагменттерді кері айналдыру мүмкін бе?

    Бұл негізінен гендерге қатысты, ал ұзын фрагменттің кері транскрипциясы көптеген гендер үшін мүмкін емес. Біріншіден, кері транскрипцияның тиімділігі ПТР -ге қарағанда әлдеқайда төмен. Екіншіден, ГК -ге бай аймақ және көптеген гендердің қайталама құрылымы кері транскрипцияны да, ПТР -ды де шектейді. Ақырында, ПТР сенімділігі мен күшейту тиімділігіне бір уақытта кепілдік беру қиын. Кері транскрипциялау процесінде ешкім көшірмесі төмен гендер үшін, әсіресе олиго dT көмегімен, ұзақ үзінді алуға кепілдік бере алмайды. ГК көп болатын 5 'УТР болсақ, одан да қиын. Сондықтан, кездейсоқ праймерлермен транскрипцияны кері қайтару, мақсатты фрагменттегі табиғи бөліну орындарын табу, сегменттер бойынша күшейту, содан кейін шектеуді сіңіру мен байланыстыруды орындау әлі де ақылға қонымды әдіс болып табылады. Жалпы алғанда, 2 кб -тан асатын фрагменттерді тікелей күшейту қиын, бірақ оны алу әрқашан мүмкін емес: 1. Біріншіден, РНҚ/мРНҚ -ның тұтастығына кепілдік беріледі, ал ТРИЗОЛ экстракциясы қолайлы. 2. M-MLV RT-ПТР жинағын тікелей қолдануға болады. Қуату уақытын ұзартыңыз және күшейту процесінде цикл санын көбейтіңіз. Сонымен қатар, кірістірілген ПТР қолдануға болады немесе фрагменттерді кеңейтуге көмектесетін қалыпты ПТР күшейтуден бұрын денатурация мен ұзарту уақытының сәйкесінше ұзартылуымен бір немесе екі реакцияны жүргізуге болады. Полимеразаның сенімділігіне назар аударыңыз. 3. Long Taq ПТР -де мінсіз нәтиже алу үшін қолданылуы мүмкін. 4. Ақуызды экспрессиялау үшін жоғары сенімді полимеразаны қолдану керек.

    Q: Quant/King Reverse Transcriptase өнімінің ерекшеліктері және оның TIANScript M-MLV-ден айырмашылығы.

    TIANGEN ұсынған кері транскриптазаның екі түрі бар: Quant/King RTase және TIANScript M-MLV. Олардың негізгі айырмашылығы - шаблондардың саны. Квант-бұл Moloney murine лейкозы вирусынан алынған жиі қолданылатын M-MLV-ден ерекшеленетін бірегей кері транскриптаз. Quant-бұл ішек таяқшасы инженериясының рекомбинантты түрде көрсететін жоғары тиімділігі жоғары жаңа транскриптазасы. Quant жоғары кері транскрипциялық белсенділігі мен жоғары шығымдылығы бар 50 нг-2 мкг РНҚ-ны күшейтуге жарамды. Кәдімгі MMLV немесе AMV -мен салыстырғанда, Quant -тің ең үлкен ерекшелігі - оның РНҚ шаблондарымен өте тығыз байланысы бар және жоғары температуралы денатурациясыз транскриптті күрделі үлгілерді кері қайтара алады. GC мазмұны жоғары шаблондар үшін кері тиімділік жоғары болады. Алайда, бұл кері транскриптазаның RNase H белсенділігі бар, ол cDNA өнімінің ұзындығына әсер етуі мүмкін (<4,5 кб шаблондар үшін жарамды). Кәдімгі кері транскрипция үшін TIANScript MMLV кері транскриптазасы ұсынылады. Бұл RTase - өте әлсіз RNase H белсенділігі бар модификацияланған фермент, ол ұзақ (> 5 кб) цДНҚ синтезіне жарайды.

    Q: бір сатылы және екі сатылы RT-ПТР арасында қалай таңдауға болады?

    Бір сатылы кері транскрипция мен ПТР күшейту сол түтікте cDNA синтезі мен күшейту арасындағы түтік қақпағын ашпай аяқталады, бұл ластануды азайтуға көмектеседі. Барлық алынған cDNA үлгілері күшейту үшін қолданылатындықтан, сезімталдығы жоғары, жалпы РНҚ -ның ең азы 0,01 пг. Бір сатылы RTPCR табысты болу үшін, әдетте, генге тән праймерлер cDNA синтезін бастау үшін қолданылады. Екі сатылы әдіс, яғни кері транскрипция және ПТР күшейту екі сатыда жүзеге асырылады. Біріншіден, кері транскрипция РНҚ үлгісінен cDNA алу үшін жүргізіледі, ал алынған цДНҚ бір немесе бірнеше ПТР реакцияларына ұшырайды. Екі сатылы әдіс cDNA бірінші тізбегінің синтезін жүргізу үшін олиго (dT) немесе кездейсоқ праймерлерді қолдана алады және белгілі бір үлгідегі барлық мРНҚ ақпаратын кері транскрипциялай алады.

    Хабарыңызды осында жазыңыз және бізге жіберіңіз